1.模型模拟疾病介绍

非酒精性脂肪性肝病（Non-alcoholicfattyliverdisease,NAFLD）是一种与代谢紊乱密切相关的慢性肝病，其特征为肝细胞内过度脂质蓄积（肝脂肪变性＞5%），且无过量饮酒史[1]。其发病机制涉及"二次打击"学说：胰岛素抵抗导致的肝细胞脂代谢失衡为初始打击，氧化应激及线粒体功能障碍引发的炎症与纤维化为进展关键[2]。全球患病率高达25%，在肥胖、2型糖尿病人群中超过70%[3]，典型表现包括肝酶升高（ALT/AST）、影像学显示的肝脂肪变，晚期可进展为非酒精性脂肪性肝炎（NASH）、肝硬化甚至肝癌。

既往研究证实，肝脏脂质代谢紊乱（如PPARγ/SREBP-1c通路激活[4]）、库普弗细胞介导的炎症反应（TLR4/NF-κB信号[5]）及肝星状细胞活化（TGF-β1促纤维化[6]）是NAFLD的核心病理环节。通过高脂饮食诱导、基因修饰（如ob/ob小鼠）或化学联合造模，可稳定模拟人类NAFLD的代谢异常-炎症-纤维化进程，此类模型已广泛应用于探究脂毒性机制（如FXR受体调节剂[7]）、抗炎靶点（如CCR2/CCR5拮抗剂[8]）及纤维化干预（如Galectin-3抑制剂[9]）的临床前评估。

相关疾病:非酒精性脂肪性肝炎(Non-alcoholicsteatohepatitis(NASH));II型糖尿病相关肝(Type2DiabetesMellitus-associatedLiverDisease);代谢综合征(MetabolicSyndrome(MetS));肥胖症相关肝损伤(Obesity-relatedLiverInjury);原发性胆汁性胆管炎(PrimaryBiliaryCholangitis(PBC))

2.模型概述

l普通浏览介绍：

如耀生物基于高脂饮食诱导（HFD）和基因编辑（如ob/ob小鼠）两大核心技术，精准构建非酒精性脂肪肝（NAFLD）动物模型，高度模拟人类疾病的脂质蓄积-炎症-纤维化进程。该模型可广泛应用于代谢性疾病新药筛选（如FXR激动剂）、肝脏毒性评估及慢性炎症机制研究，为脂肪肝及相关并发症研究提供标准化实验工具。

l专业模型介绍：

如耀生物通过高脂饲料诱导（High-FatDiet,HFD）、化学联合造模（如CCl4联合高脂）及基因编辑技术（如ob/ob小鼠）三大核心方法构建非酒精性脂肪肝动物模型。在高脂饮食诱导体系中，采用60%脂肪供能比的定制饲料（含棕榈酸/胆固醇）持续喂养C57BL/6小鼠12-16周，可稳定诱导肝脂肪变性（肝组织油红O染色阳性面积＞40%）及轻度炎症（血清ALT/AST升高1.5-2倍）；若需模拟晚期纤维化，联合每周2次CCl4腹腔注射（0.5mL/kg，8周）可显著激活肝星状细胞，导致胶原沉积（Masson染色阳性率＞25%）。对于基因修饰模型，瘦素缺陷型ob/ob小鼠在常规饲养下自发形成重度脂肪变性（肝重比＞6%），并伴随胰岛素抵抗（HOMA-IR指数≥5.0）。

该模型系统精准复现人类NAFLD的核心病理进程：组织学层面通过NAS评分（NAFLDActivityScore）证实脂肪变性（≥3分）、小叶炎症（≥2分）和气球样变（≥1分）的典型特征；分子机制上呈现PPARγ/SREBP-1c通路介导的脂质合成亢进（肝脏TG含量≥50mg/g）、TLR4/NF-κB驱动的炎症反应（TNF-αmRNA表达上调3-5倍）及TGF-β1/Smad3依赖的纤维化激活（α-SMA+细胞增加4-6倍）。此外，模型可拓展用于研究NAFLD相关并发症，如肝细胞癌（HCC）转化（通过DEN诱导）或心血管共病（主动脉粥样硬化斑块评估）。

在标准化构建过程中，我们严格控制环境变量（SPF级饲养、12/12小时光暗周期）、代谢监测（每周体重/空腹血糖跟踪）及终点验证（肝脏病理学+血清生化联检）。模型构建成功率≥90%，数据变异系数（CV）＜15%，适用于FXR/PXR靶点药物筛选（如奥贝胆酸临床前验证）、抗纤维化疗法评估（如Galectin-3抑制剂）及代谢重编程机制研究，为NAFLD转化医学提供高一致性的实验平台。

l服务亮点/较同行的特长：

1.高仿生性模型：严格模拟人类NAFLD病理进程，脂肪变性、炎症及纤维化关键指标与临床高度一致，数据重复性优异（批内CV<15%）。

2.全流程标准化：从造模条件（SPF级环境、定制饲料）到终点评估（组织学+分子检测），提供可追溯的标准化操作体系，支持药效评价与机制研究。

3.典型应用(UseCases)

(1) 降脂药物体内药效评价：如：FXR激动剂奥贝胆酸（OCA）10mg/kg干预高脂饮食模型8周，肝脏TG含量自55mg/g降至28mg/g，NAS评分下降≥2分（详见参考[7]）

(2) 抗炎靶点机制验证：如：CCR2/CCR5双拮抗剂Cenicriviroc30mg/kg治疗NASH模型12周，肝组织TNF-αmRNA表达下调60%，纤维化面积减少35%（详见参考[8]）

(3) 抗纤维化化合物筛选：如：Galectin-3抑制剂Belapectin8mg/kg干预CCl4联合高脂模型6周，肝胶原沉积比例（Masson染色）由18%降至9%，α-SMA+细胞减少50%（详见参考[9]）

(4) 胰岛素增敏剂疗效测试：如：PPARγ激动剂吡格列酮10mg/kg治疗ob/ob小鼠4周，HOMA-IR指数自8.5降至3.2，肝脏脂肪变性面积缩小40%（详见参考[10]）

(5) 肝细胞癌（HCC）转化研究：如：DEN联合高脂模型52周诱发HCC（发生率70%），肿瘤组织AFP表达阳性，可用于靶向药物（如PD-1抑制剂）疗效评估（详见参考[11]）

(6) 生物标志物开发与验证：如：血清Pro-C3水平在纤维化模型中较对照组升高3倍（AUROC=0.89），与肝组织胶原含量显著相关（详见参考[12]）

4.工作流程速览

模型构建阶段

l动物准备：C57BL/6小鼠（8周龄，雄性）/ob/ob小鼠（瘦素缺陷型）

诱导方法：

1. 高脂饮食(HFD):60%脂肪供能饲料（含棕榈酸/胆固醇），持续12-16周

2. 化学联合诱导：HFD+CCl4（0.5mL/kg，每周2次，腹腔注射，8周）

3. 基因修饰模型：ob/ob小鼠常规饲养（自发脂肪肝）

基础监测：每周记录体重、空腹血糖（尾静脉采血）；每4周检测血清ALT/AST（肝功能指标）

药效研究（如需干预实验）

l分组设计：空白对照组（普通饲料）；模型组（HFD/CCl4）；治疗组（HFD+待测药物，如FXR激动剂、GLP-1类似物）

l给药周期：干预4-12周（根据药物机制调整）

l监测指标：体重、摄食量（每周）、口服葡萄糖耐量试验（OGTT，干预中期/终点）

终点检测

工作过程流程图

l模型验证

图1 小鼠不同时期HE染色图

                                                             doi:10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2018.05.003

5.交付成果(Deliverables)

1）动物基本信息与建模数据

(1) 品系/周龄：C57BL/6小鼠（或ob/ob小鼠），8-10周龄

(2) 体重动态曲线：每周体重变化（含干预组vs对照组）

(3) 代谢指标：空腹血糖、HOMA-IR指数、血清ALT/AST（U/L）

(4) 成模率统计：基于NAS评分≥3的动物比例（如HFD组85%）

(5) 肝脏指数：肝重/体重比（%）

2）组织病理学图像与定量分析

(1) HE染色：全视野高清切片（20×/40×），标注脂肪变性、炎症浸润及气球样变区域

(2) 油红O染色：肝脂肪变性面积定量（ImageJ分析，%阳性区域）

(3) Masson染色：胶原沉积面积（纤维化比例%，附标尺）

(4) 病理注释：NAS评分表（脂肪变性、炎症、气球样变单项评分及总分）

3）分子标志物检测

免疫组化（IHC）：

(1) α-SMA（肝星状细胞活化，阳性细胞数/视野）;F4/80（巨噬细胞浸润，阳性面积%);

(2) TGF-β1/CollagenI（纤维化标记，H-score定量）

炎症因子定量：

(3) 1.血清/肝组织匀浆ELISA数据（TNF-α、IL-6、IL-1β，pg/mL）

(4) 2.qPCR/WB结果（PPARγ、SREBP-1c、TGF-β1相对表达量）

3)完整项目总结报(PDF):

(1) 实验方法：造模流程（饲料配方、给药方案）、检测标准（评分体系）

(2) 结果总结：关键数据图表（体重曲线、NAS评分、胶原面积对比）

(3) 统计学分析：组间差异（t检验/ANOVA，*p*<0.05标注）

(4) 参考文献：检测方法引用文献

4) 原始数据包

Excel表格：

(1) 血清生化原始数据（ALT、AST、TG等）

(2) 组织病理定量结果（油红O、Masson面积%）

(3) 分子检测原始值（ELISA吸光度、qPCRCt值）

图像文件：

(1) 未裁剪的染色切片高清图（.tiff格式）

(2) 免疫组化热图生成文件（Python/ImageJ脚本）

l交付说明

1．数据可溯源性：所有图像均附带标尺及拍摄参数（如显微镜物镜倍数）

2．格式统一性：报告采用中英双语，原始数据包分层归档（按检测类别命名文件夹）

3．质控文件：附动物伦理审批号及SPF环境监测记录（可选）

6.时间线和价格(Timeline&Pricing)

120-180天，价格面议

7.快速下单(GetStarted)

扫码填写需求表，或直接联系我们：技术顾问：13780009482叶博士|bioslu@163.com（此文档仅作宣传，详细技术协议与质控指标可按需定制）

参考文献：

[1] Chalasani N, Younossi Z, Lavine JE, et al. The diagnosis and management of nonalcoholic fatty liver disease: Practice guidance from the American Association for the Study of Liver Diseases. Hepatology. 2018;67(1):328-357.

[2] Tilg H, Moschen AR. Evolution of inflammation in nonalcoholic fatty liver disease. Gastroenterology. 2010;138(5):1832-1845.

[3] Younossi ZM, Koenig AB, Abdelatif D, Fazel Y, Henry L, Wymer M. Global epidemiology of nonalcoholic fatty liver disease. Hepatology. 2016;64(1):73-84.

[4] Postic C, Girard J. Contribution of de novo fatty acid synthesis to hepatic steatosis. J Clin Invest. 2008;117(6):1455-1464.

[5] Miura K, Kodama Y, Inokuchi S, et al. Toll-like receptor 9 promotes steatohepatitis. Gastroenterology. 2010;139(1):323-334.

[6] Inagaki Y, Okazaki I. TGF-β signaling in hepatic fibrogenesis. Gut. 2007;56(2):284-292.

[7] Neuschwander-Tetri BA, Loomba R, Sanyal AJ, et al. Obeticholic acid for non-alcoholic steatohepatitis. Lancet. 2015;385(9972):956-965.

[8] Lefebvre E, Moyle G, Reshef R, et al. Antifibrotic effects of the dual CCR2/CCR5 antagonist cenicriviroc in animal models of liver and kidney fibrosis. PLoS One. 2016;11(6):e0158156.

[9] Harrison SA, Wong VW, Okanoue T, et al. Belapectin for fibrosis in NASH. J Hepatol. 2020;72(1):25-33.

[10] Sathyanarayana P, Jogi M, Muthupillai R, Krishnamurthy R, Samson SL, Bajaj M. Effects of combined exenatide and pioglitazone therapy on hepatic fat content in type 2 diabetes. Obesity (Silver Spring). 2011;19(12):2310-2315.

[11] Zolzaya K, Nakamura A, Tajima K, Terauchi Y. Role of insulin receptor substrate-1 for diethylnitrosamine plus high-fat diet-induced hepatic tumorigenesis in mice. J Diabetes Investig. 2014;5(1):27-30.

[12] Boyle M, Tiniakos D, Schattenberg JM, et al. Performance of the PRO-C3 collagen neo-epitope biomarker in non-alcoholic fatty liver disease. JHEP Rep. 2019;1(3):188-198.

[13] Jiang Y, Gao YQ, Zhu MQ, et al. Establishment of the nonalcoholic fatty liver disease model in C57BL/6 mice [in Chinese]. Bengbu Med Coll J. 2018;43(5):589-593. doi:10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2018.05.003.