在实验室的培养箱中，藏着两类性格迥异的“住户”：一类偏爱 “安家落户”，紧紧贴附在容器表面舒展生长，是细胞界的「安居派」；另一类则习惯 “随波逐流”，在培养液中自由悬浮，堪称「漂流族」。它们就是贴壁细胞与悬浮细胞                                                               

—— 看似只是生长方式不同，实则在生物学特性、培养逻辑和应用场景上有着天壤之别。本文将深入剖析这些差异，并分享那些在日常培养中至关重要却又容易被忽视的细节。

本质差异：为何有的“安家” 有的 “漂流”？

细胞的“生活方式”，并非培养箱决定，而是它在体内命运的延续—有的注定依附基质而生，有的天生漂浮于液体之中

贴壁细胞：基质依赖的“定居者”。

这类细胞多来源于实体组织，比如成纤维细胞、肝细胞，甚至乳腺癌、肺癌等肿瘤细胞。它们在体内就附着在细胞外基质（ECM，如胶原蛋白、纤连蛋白）上生长，离体后仍保留“黏附本能”——必须贴附在经特殊处理的培养容器表面，才能伸展成梭型、扇形等形态，进而增殖。其黏附过程需要通过整合素（Integrins）与细胞骨架（主要是F-actin）相连，形成黏附斑（Focal adhesion），进一步触发FAK、PI3K/Akt等信号通路维持存活。失去黏附后，这些信号中断，会诱发所谓“失巢凋亡”（Anoikis）

失巢凋亡的途径

来源：J Pathol：Anoikis: an emerging hallmark in health and diseases

悬浮细胞：无拘无束的“流浪者”

主要来自血液、脾脏或骨髓，比如淋巴细胞、白血病细胞等。它们不依赖基底附着，而是依靠自分泌或旁分泌的细胞因子（如IL-2、IL-7）或细胞间短暂接触维持存活。悬浮体系中的信号传递更像“群体协作”，通过表面受体和局部因子交流，形成一种漂浮但有序的动态平衡。

操作雷区：传代到监测，步步惊心的关键差异

两类细胞的“生活习惯” 不同，实验室操作逻辑也截然不同，堪称细胞培养的 “新手分水岭”

从新手到高手：提升细胞状态不可不知的细节

贴壁细胞：消化是艺术，亦是科学

被忽视点：消化终点的判断

误区：严格按时间表操作

建议：不同细胞系胰酶消化时间差异大（如293T细胞1分钟，HeLa细胞3分钟），新手易按固定时间操作，导致部分细胞消化过度（细胞膜破损）、部分未消化（贴壁牢固）。正确做法是37℃孵育时，每30秒在显微镜下观察，待80%细胞变圆即可终止。

被忽视点：细胞吹打的力度与技巧

误区：暴力吹打以求高效

建议：使用口径适中的移液管，让培养基沿培养瓶壁流下，轻柔反复吹打。目标是产生温和的剪切力使细胞脱落并分散成单细胞，而非撕裂细胞。吹打后溶液应轻微浑浊但无泡沫。

悬浮细胞：稳态生长重于一切

被忽视点：代谢废物的累积

误区：只关注细胞密度，忽视培养基营养耗尽和代谢废物（如乳酸、铵离子）的毒性

建议：悬浮细胞因代谢快，培养基易积累废物，需1-2 天换一次液，或通过半换液（更换一半新鲜培养基）维持营养平衡。

被忽视点：细胞团块的处理

误区：强行吹散所有细胞团块

建议：小的、松散的细胞团（<10个细胞）对生长影响不大，有时甚至有利于某些细胞的生长。强行吹散会损伤细胞。仅需处理大的、紧密的团块，可通过使用细胞筛网或更温和的吹打方式。

被忽视点：死细胞的处理

误区：以为死细胞自己会消失

建议：悬浮细胞培养中死细胞较多时，可通过多种方法去除：最常用的是低速离心（300×g，5 min，室温），弃去上清并以新鲜培养基重悬；若有大量碎片或DNA黏团，可加入少量EDTA和DNase I短暂处理后再洗涤。需要更高纯度时，可采用Ficoll或Percoll密度梯度离心分离，或使用Annexin V磁珠去死细胞试剂盒去除凋亡细胞；若用于后续功能实验或单细胞测序，可通过流式细胞术结合PI/7-AAD排除死细胞。实际应用中应同时检查死亡原因并优化培养条件，防止持续性细胞损伤

通用关键点：冻存与复苏

被忽视点：冻存细胞的状态。

误区：在任何时期都可以冻存。

建议：冻存前应确保细胞处于对数生长期、活率>95%。此时细胞膜完整、代谢旺盛，抗冻保护剂渗透均匀。若在平台期或状态不佳时冻存（如密度过高、营养耗尽）甚至有污染时冻存，则复苏后常出现贴壁困难、分裂迟缓或活率骤降。换言之，细胞的“临终时刻”并非保存的好时机。

被忽视点：复苏的速度。

误区：复苏时慢速化冻。

建议：细胞复苏遵循“慢冻快融”原则。贴壁细胞冻存液中DMSO浓度宜为10%–20%，悬浮细胞为5%–10%。快速在37℃水浴中1分钟内完全融化，可避免冰晶在膜内重结晶造成机械损伤。切记：融化后应立即以培养基稀释并离心去除DMSO，否则其穿膜性毒性会持续损伤细胞。

没有“优劣”，只有 “适配”

贴壁细胞的“安居” 与悬浮细胞的 “漂流”，本质是细胞对生存环境的适应策略。下次培养细胞时，不妨对照这份指南检查每一步操作-或许你忽略的某个小细节，正是解锁实验难题的关键。

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