腺相关病毒（AAV）包装技术服务

1.服务介绍(ServiceOverview)

1.1基本介绍

本公司提供基于腺相关病毒（AAV）载体的基因递送技术服务。我们利用多种常见血清型（如AAV2,AAV6,AAV9等）的病毒包装系统，为客户的目的基因（如cDNA,shRNA,gRNA等）提供病毒包装、浓缩纯化、滴度测定及体外细胞感染服务。该服务旨在帮助客户实现外源基因在靶细胞中的高效转导和长期稳定表达，为基因功能研究提供一种有效的工具。

1.2服务价值

高效转导：AAV病毒对多种细胞类型具有较高的感染效率，尤其对难转染的细胞效果显著。

安全低毒：AAV病毒具有低免疫原性和非致病性的特点，对细胞状态影响较小。

流程稳定：采用成熟的三质粒共转染包装流程和标准化的纯化方法，保证病毒生产的稳定性和一致性。

研究工具：为客户在体外细胞水平进行基因功能研究提供一种可靠的技术手段和病毒产品。

2.技术原理与实验流程

2.1技术原理

腺相关病毒（AAV）是一种小型、无包膜的单链DNA病毒，其复制需要腺病毒或疱疹病毒的辅助。重组AAV病毒载体在去除病毒本身的编码序列后，保留了末端的反向末端重复序列（ITRs），用于包装目的基因。其通过识别细胞表面的特定受体进入细胞，形成的病毒基因组可长期以附加体形式存在，从而实现目的基因的长期、稳定表达。

2.2实验流程

1）方案设计与质粒准备：根据客户需求（过表达或敲低）及目标细胞类型选择并构建相应的AAV载体质粒（含ITR和目的基因），并准备包装质粒（含rep/cap基因）和辅助质粒（提供腺病毒功能）。

2）病毒包装与生产：采用PEI转染法将三种质粒共转染至HEK293细胞中，转染后特定时间点收集细胞，通过反复冻融法释放病毒颗粒。

3）病毒浓缩与纯化：采用氯化铯密度梯度离心法或碘克沙醇梯度离心法对病毒粗提液进行浓缩和纯化，以获得高纯度的病毒液。

4）滴度测定：采用qPCR法定量检测病毒基因组拷贝数（GC/ml），确定纯化后的病毒滴度。

5）细胞感染与验证（可选）：使用不同感染复数（MOI）的病毒感染客户的目标细胞，通过荧光观察或qPCR/WB等方式验证基因表达效率。

6）报告交付：

l提供完整的实验报告，包括病毒滴度测定数据、SDS-PAGE纯度检测结果（如涉及）及感染效率数据（如涉及）。

l交付纯化后的高滴度AAV病毒原液。

滴度检测：qPCR标准曲线测定（ITR）

纯度（SDS-PAGE）检测

3.平台特点与服务优势

3.1平台特点

1）血清型多样：可提供AAV2,AAV6,AAV9等多种常见血清型的包装服务，以匹配不同细胞的感染特性。

2）灵活可选：客户可选择全服务（从包装到感染验证）或部分服务（如只包装和纯化病毒）。

3）用途明确：主要用于体外（invitro）细胞水平的基因功能研究。

4）目的导向：服务核心是为客户提供可用于后续实验的高纯度、高滴度AAV病毒产品。

3.2服务优势

1）稳定的病毒包装：基于成熟的三质粒包装系统和稳定的HEK293细胞，确保病毒包装的成功率和效率。

2）严格的纯度控制：采用梯度离心法进行纯化，有效去除空壳病毒和细胞杂质，提供纯度较高的病毒制品。

3）准确的滴度鉴定：采用qPCR法对病毒基因组进行绝对定量，为客户提供准确可靠的滴度数据，便于后续实验设计。

4）可靠的产品交付：交付的病毒产品经过质量检测，数据清晰透明，客户可直接用于体外细胞感染实验。

4.应用领域

我们的服务旨在为客户在以下领域的研究提供稳定可靠的技术支持：

按细胞类型

l常见贴壁细胞系：为HEK293,HeLa,Huh-7等常见贴壁细胞系的基因操作提供高效转导。

l难转染细胞：为原代神经元、心肌细胞、MSCs等难转染细胞的基因功能研究提供有效工具。

l悬浮细胞：可尝试为部分悬浮细胞系提供感染服务。

按研究目的

l基因功能研究（体外）：通过AAV介导的基因过表达或shRNA敲低，在体外细胞模型中研究目标基因的功能。

l报告基因系统：构建基于AAV的报告基因细胞模型，用于信号通路研究或药物初筛。

lCRISPR基因编辑：提供包装表达CRISPR/Cas9系统的AAV病毒，用于体外细胞的基因编辑。

l工艺前期探索：为基因治疗等领域的AAV生产工艺开发提供前期的病毒包装工艺和数据支持。