稳转报告基因细胞系构建

1. 服务介绍 (Service Overview)

1.1 基本介绍

本公司提供一系列基于常见人类肿瘤细胞系（如HEK293, HeLa, HepG2, A549等）构建的、经过验证的报告基因稳定细胞株现货库。这些细胞株通过将特定信号通路（如NF-κB, STAT3, Wnt等）的响应元件与Promega Firefly Luciferase报告基因偶联，并稳定整合到基因组中构建而成。当相应的信号通路被激活或抑制时，会特异性地上调或下调Luciferase的表达，从而通过检测荧光素酶活性来定量监测通路活性。我们为客户提供冻存的细胞株及其培养说明书和基本验证数据。

1.2 服务价值

即买即用：提供“现货”细胞库，省去客户自行构建稳定细胞系长达数月的繁琐过程，节省大量时间。

信号通路监测：提供一种便捷、定量化的工具，用于监测细胞内特定信号通路的活性变化。

稳定可靠：报告基因系统已稳定整合，避免了瞬转的效率和批次间差异问题，实验结果重复性更好。

工具交付：直接交付冻存的细胞株，客户复苏后即可用于后续的通路研究或化合物筛选。

2. 技术原理与实验流程

2.1 技术原理

报告基因检测技术是将目的信号通路的特异性响应元件（如NF-κB的重复序列、STAT3的应答元件等）插入到一个最小启动子（如Minimal TATA promoter）的上游，并驱动下游报告基因（本系统为Firefly Luciferase）的表达。将该报告基因构件通过慢病毒转导等方式稳定整合到细胞基因组中。当细胞内的目标通路被上游信号（如细胞因子、小分子化合物、基因操作）激活时，相应的转录因子会结合到响应元件上，启动报告基因的表达。通过添加底物并检测产生的化学发光信号（RLU值），即可定量、灵敏地反映通路活性的强弱。

2.2 实验流程

1）载体构建与病毒包装（已完成）：已完成包含特定响应元件-Firefly Luciferase的报告载体的构建，并制备了高滴度的慢病毒液。

2）细胞感染与抗性筛选（已完成）：使用慢病毒感染目标亲本细胞系（如HEK293），随后使用适当的抗生素（如Puromycin）进行压力筛选，杀死未成功整合报告系统的细胞。

3）单克隆化与扩增（已完成）：将存活下来的细胞进行有限稀释，挑选单克隆，并扩大培养，建立单克隆细胞系。

4）功能验证（已完成）：对单克隆细胞系进行功能验证：

l 刺激验证：使用已知的通路激活剂（如TNF-α for NF-κB）刺激细胞，检测荧光素酶活性是否显著升高。

l 抑制验证：使用已知的通路抑制剂处理后再刺激，检测荧光素酶活性是否被有效抑制。

l 背景信号检测：检测未刺激细胞的基础信号水平。

5）细胞冻存与交付：

l 对验证合格的细胞株进行大规模培养和冻存，建立细胞库。

l 为客户提供冻存管形式的细胞株、详细的培养说明书（培养基、抗生素维持浓度等）及基本的验证数据（刺激倍数、Z'因子等）。

3. 平台特点与服务优势

3.1 平台特点

1） 通路覆盖广泛：现货库覆盖了NF-κB, STAT3, Wnt-TCF, TGF-β-SMAD, NRF2-ARE, p53, Hippo-YAP等药物研发中备受关注的核心信号通路。

2） 细胞背景清晰：基于HEK293, HeLa, HepG2, A549等常见、易于培养的肿瘤细胞系构建，细胞背景清晰，生长状态稳定。

3） 系统经过验证：每一株细胞都经过基本的激活剂/抑制剂验证，确保其对通路刺激有响应，并提供基本的效能数据（如刺激倍数）。

4） 即用型工具：产品定位明确，是客户开展下游功能研究的标准化工具细胞。

3.2 服务优势

1） 节省研发时间：客户无需经历耗时数月的载体构建、病毒包装、细胞筛选和验证过程，下单后短时间内即可获得实验工具，极大加速项目进程。

2） 数据稳定可靠：稳转细胞株避免了瞬转的批次差异，实验重复性高，为药物筛选和机制研究提供可靠的数据基础。

3） 技术门槛低：客户仅需进行常规细胞培养和Promega Luciferase检测（操作简单、信号灵敏），即可开展实验，无需特殊设备和技术。

4） 质量清晰可控：随细胞附赠基本验证数据，细胞状态和性能透明可信，方便客户评估和使用。

4. 应用领域

我们的稳转报告基因细胞株现货库旨在为以下研究领域提供稳定、便捷的工具和支持：

按细胞类型（现货库举例）

l HEK293背景：适用于一般性通路机制研究、受体配体功能研究，细胞易转染，易于进行后续基因操作。

l HeLa背景：适用于癌症相关通路研究、化合物筛选。

l HepG2背景：适用于肝脏毒性评估、代谢相关通路（如NRF2）研究、化合物肝毒性筛选。

l A549背景：适用于肺cancer 相关研究、炎症通路（如NF-κB）研究。

按研究目的

l 化合物高通量/高内涵筛选：为核心信号通路激动剂或拮抗剂的初步筛选提供稳定、均质的检测工具。

l 药物作用机制研究：验证候选药物是否通过影响特定信号通路发挥功能。

l 功能基因研究：通过过表达或敲低特定基因，利用报告细胞系统快速评估该基因对下游通路的影响。

l 天然产物/中药提取物活性评价：快速筛选具有特定通路调节活性的天然成分。

l 环境毒素或应激源评价：评估化学物质、辐射等应激源对特定信号通路的影响。

5.客户下单及项目信息填写

在我司官网http://www.ruyaobio.com/按照页面提示填写项目名称、选择项目类型、填写个人信息及联系方式，提交项目所需要的具体信息，或直接联系我们，技术顾问：13780009482 | bioslu@163.com。